Protocol集合
Co-IP实验详细操作方案&血清分离实验方法
本实验全部操作均在贝克曼库尔特4度离心机中操作
Co-IP实验详细操作方案:
待验证互作的A和B质粒共转染细胞(转染实验步骤略)约48h后收集细胞样品,用PBS轻轻洗3遍,加入lysis buffer裂解液(已加入各种蛋白酶抑制剂和0.1M DTT)600µL,冰上裂解30min,用枪头轻轻吹下细胞裂解物吸入EP管中,4℃离心机12000rpm 10min,取出约60µL上清作为阳性对照,剩余上清转移至新的EP管中,按BCA法测定蛋白浓度。
预处理Protein G Beads:向EP管中加入琼脂糖G蛋白40µL,以及1%BSA封闭液500µL,4℃旋转摇床摇荡4h,然后Beads和1%BSA混合液4℃离心10000rpm 10s,弃去上清,再加入600µL lysis buffer,4℃旋转摇床润洗10min,然后4℃离心10000rpm 10s,弃上清,加入IP一抗约3µL和至少450µg总蛋白,4℃旋转摇床过夜,然后4℃离心10000rpm 10s,小心弃上清,加入500µL lysis buffer对Beads进行清洗,旋转摇床摇5min,4℃离心10000rpm 10s,最后留约20µL上清液,加入5×loading buffer 5µL,和阳性上清对照一起煮沸5min,跑SDS-PAGE,通过western blotting进行蛋白互作情况的检测。
血清分离实验方法:
由于本课题组涉及部分应用研究实验,因此常常采集动物血液样品进行相关实验的验证研究。采集来的血液一般是通过贝克曼库尔特4度离心机进行分离,首先是把采血器中的血液样品移至1.5mL离心管,然后在4度离心机中离心8000 rpm 4min,轻轻取出离心管,将上层血清移至新的EP管中,标记好编号、日期、动物种类,进行ELISE等后续检测。
王国庆 8月27日 231 4 2

评论区

有需要的童鞋,我这还有其它实验的详细方案
方案不错
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